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Cepas de hongos – Almacenamiento con nitrógeno líquido

tubo ensayo nitrogeno liquido setas cepas conservacion hongosEs el mejor método de almacenamiento a largo plazo porque el crecimiento micelial es completamente detenido a -196° C. Este método mantiene viable un cultivo madre por muchos años. Solamente los cultivos de más alta calidad se deben seleccionar para un almacenamiento a largo plazo.

El almacenamiento de cepas en nitrógeno líquido es muy bueno, pero caro. Los costos iniciales por adquisición de equipo son altos y el nitrógeno líquido es un gasto constante cada mes. La unidad de almacenamiento de nitrógeno requiere un constante monitoreo para ver el nivel de nitrógeno en la cámara.

Este método involucra el llenado de un cryotubo (tubo especial diseñado para uso de nitrógeno líquido) con un cryoprotector y sumergir en él algunos trozos de agar o granos de semilla. Los cryotubos llenos son entonces colocados en una caja dividida o en una “caña” antes de almacenarlos en la cryo-unidad. El propósito del cryoprotector es minimizar el daño a las células durante el ciclo de enfriamiento y congelación. Hay muchos cryoprotectores, pero el más popular es el que se prepara con 10% de glicerol en agua. Se mezcla 1 ml de glicerol en 9 ml de agua destilada en un tubo con tapa de rosca y se esteriliza en autoclave por 15 minutos a 121° C.

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Cepas de hongos – Almacenamiento en aceite mineral

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Como en los métodos precedentes, el almacenamiento en aceite mineral no requiere equipo caro, además, en el caso particular de cepas de macromicetos parece ser adecuado para largos períodos de tiempo.

Las muestras son pequeñas piezas de medio de cultivo invadidas por micelio. Para preparar las muestras, las cepas se depositan en una caja de Petri con un medio de cultivo.Las cepas se conservan en tubos de 30×90 mm. Son cultivadas sobre medio nutritivo sólido inclinado directamente en los tubos de almacenamiento.

El micelio es incubado a 25° C, hasta que invade la superficie del medio. Enseguida se cubre con 15 ml de aceite mineral (esterilizado en autoclave). Los tapones, roscados, no deben estar totalmente cerrados para permitir la circulación de aire. Los tubos son conservados en un lugar climatizado a 16° C.

La mutagénesis de los hongos

mutagenesis setas esporasEn algunos casos particulares es necesario hacer mutagénesis. Estos son los casos donde el carácter que se investiga no existe en la especie que se quiere mejorar. Es preciso ser consciente de que una mutagénesis modifica siempre un gran número de genes, y que después hay por delante un trabajo muy largo de cruzamientos para eliminar las mutaciones indeseables.

Un ejemplo de variedades obtenidas por mutagénesis es el de las variedades de P. ostreatus y P. pulmonarius sin esporas. Entre estas especies no se encuentran en la naturaleza formas que no produzcan esporas. Al respecto se sabe que las esporas de Pleurotus spp se propagan abundantemente por las salas de cultivo provocando alergias graves entre los cultivadores.

Para obtener variedades sin esporas es necesario realizar mutagénesis. Para ello, al micelio dicariótico (con el fin de seleccionar mutaciones dominantes) se le provoca mutagénesis ya sea con rayos ultravioleta o con un agente mutágeno como la N-metil-N-Nitrosoguanidina, en otros. Después de la mutagénesis, los micelios se colocan en cultivo, en recipientes con unos 500 g de substrato y después de la fructificación, se toman muestra de los basidiocarpos para medir la producción de esporas y seleccionar los mutantes que no produjeron esporas. Por ejemplo en un caso de P. pulmonarius, de 1500 cepas, 14 mutantes presentaron una esporulación reducida.

 

PLEUROTUS OSTREATUS

Frecuente se prosigue el mejoramiento genético encaminado a reestablecer el rendimiento y su morfología, dado que es normal que los mutantes posean un rendimiento débil y morfología anormal. Con este fin, se utiliza otra capacidad del micelio del hongo, conocida bajo el nombre de fenómeno de Buller, que hace que sea posible transferir por anastomosis el núcleo de un dicarionte al micelio de un homocarionte compatible. De esta manera, los núcleos de los dicariontes que llevan la mutación sin esporas son transferidos a los homocariontes silvestres, todo esto a través de varias generaciones. Este procedimiento ha permitido restablecer una morfología y un rendimiento normales, conservándose el carácter sin esporas .

Obtener un clon – clonacion setas

Luego de preparar el medio de cultivo en el cual se quiere que desarrolle el micelio de la cepa, se vierten 10 ml del medio líquido (45°C) en cada tubo de ensayo de 20^180 mm (22-25% del volumen) y colocan los tapones de algodón .

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Cultivo del tejido – Recetas con agar

Los cultivos aislados de esporas difieren genéticamente del cultivo de tejidos. Los cultivos que se originan de esporas son impredecibles ya que cuando germinan resultan en muchas combinaciones genéticas diferentes. Estas combinaciones son deseables cuando se trata de desarrollar una nueva cepa, pero indeseables cuando se trata de mantener una cepa específica. Un tejido cultivado es esencialmente un clon del hongo. Un clon se define como un duplicado idéntico de un organismo. Sigue leyendo Cultivo del tejido – Recetas con agar

Homocariontes a partir de protoplastos

Las esporas surgen de la meiosis: la mezcla genética y las recombinaciones de los cromosomas parentales. La probabilidad de reencontrar los genotipos parentales en una espora es muy escasa por no decir nula. Sigue leyendo Homocariontes a partir de protoplastos

Partes del hongo y de una seta

En el hongo hay que diferenciar dos partes fundamentales: el cuerpo vegetativo y el cuerpo reproductor. El cuerpo vegetativo, que se encuentra bajo el suelo, está formado por unos filamentos llamados hifas que pueden ser unicelulares (con sucesión de núcleos). Sigue leyendo Partes del hongo y de una seta

Reproducción Setas y Hongos

 

ciclobasidios

 

 

a) ESPORA

Semilla, órgano reproductor equivalente a la semilla del Reino Vegetal o a los espermatozoides del Reino Animal. Al madurar, caen o vuelan por miles o por mi- llones al suelo. La inmensa mayoría no logra germinar. Sigue leyendo Reproducción Setas y Hongos